HiScript?III Reverse Transcriptase 高溫反轉錄酶

更高效的第三代反轉錄酶,更高的反應溫度有助于打開RNA的二級結構,更高的反應效率,質量同Superscript III反轉錄酶

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HiScript?III Reverse Transcriptase
更高效的第三代反轉錄酶(逆轉錄酶),更高的反應溫度有助于打開RNA的二級結構,更高的反應效率,質量同Superscript III反轉錄酶。

貨號 規格 價格
HKR2305-01 10000U(200U/ul) 2000.00



廣泛的模板兼容性:可兼容動物、植物、細胞、病毒等多種模板
超強的雜質耐受度:對于常見雜質(乙醇、異丙醇、水平衡酚、腐殖酸)均具有超強的耐受度
卓越的逆轉錄效率:逆轉率效率等同于國際著名公司的Superscript III反轉錄酶,承諾質量完全一致,可以直接替代。

1μg HeLa細胞RNA為模板,按照說明書推薦體系進行反轉錄,以1μl cDNA為模板,用PCR進行長片段擴增,將得到的產物進行瓊脂糖凝膠電泳,結果如圖所示:擴增條帶單一且產量高

長片段擴增電泳圖

HiScript? III Reverse Transcriptase對于復雜二級結構的RNA,推薦的反應溫度為50~55℃,對于存在復雜二級結構的模板,可將逆轉錄溫度提高至60~65℃,避免RNA復雜二級結構對cDNA合成的抑制,可有效合成高質量的cDNA。本產品可以合成長達12Kbp的cDNA,除此之外,本產品仍具有優越的持續合成能力和超強的雜質耐受度。

組分 HKR2305-01 (10000 U)
5 × HiScript?III Buffer 500 μl
HiScript?III Reverse Transcriptase (200 U/μl) 50 μl


- 30℃~- 15℃保存


附件:實驗操作步驟

 

第一鏈cDNA合成

1. RNA變性(此步為可選步驟,RNA變性有助于打開二級結構,可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產量。)

組分

使用量

Rnase free ddH2O

to 12μL

Oligo(dT)18 (50   μM)

1 μL

Or   Random Primers (50 μM)

or 1μL

Or Gene   Specific Primers (2   μM)

or 1μL

Total RNA

Total   RNA: 1 ng -5 μgmRNA:1   ng-500 ng

dNTP mix

1μL

65℃加熱5 min,迅速置于室溫2 min。簡短離心收集反應液后,加入下表中的逆轉錄反應液,并輕輕吹打混勻。


2. 逆轉錄反應體系配制(20μL體系)

組分

使用量

上一步的反應液

12μL

5× HiScript Buffer

4μL

DTT

2μL

HiScript?III Reverse   Transcriptase(200 U/μL)

1 μL

RNase inhibitor (40 U/μL)

1 μL


3. 逆轉錄程序設置

溫度

時間

25(可選)

5 min

50-55

15-50 min

85(可選)

5 min


【注】:
1)當使用Random Primers時,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo(dT)18或Gene Specific Primers,此步可省略。

2)逆轉錄溫度:推薦使用50-55℃。對于高GC含量模板或者復雜二級結構的模板,可將逆轉錄溫度提高至60-65℃。

3)85℃加熱5 min,目的是使逆轉錄酶失活,對于后續需要進行其他實驗的,比如二鏈合成等,此步驟需要省略。

※ 逆轉錄產物可立即用于后續PCR或qPCR反應,也可-20℃短期保存,若需長期保存,建議分裝后,于-80℃保存,避免反復凍融。


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